Bag-ong Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluorescent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Bag-ong Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit(Fluorescent RT-PCR Probe Method)
【Packaging specifications 】25 Mga Pagsulay/Kit
【Intended usedad】
Kini nga kit gigamit para sa qualitative detection sa nucleic acid gikan sa bag-ong coronavirus sa nasopharyngeal swabs, oropharyngeal (throat) swabs, anterior nasal swabs, mid-turbinate swabs, nasal wash ug nasal aspirates gikan sa mga indibidwal nga gisuspetsahan sa COVID19 sa ilang healthcare provider. Ang pagkakita sa ORF1ab ug N nga mga gene sa bag-ong coronavirus mahimong magamit alang sa auxiliary diagnosis ug epidemiological monitoring sa bag-ong impeksyon sa coronavirus.
【Principles of the procedure 】
Kini nga kit gidisenyo alang sa piho nga mga pagsusi sa TaqMan ug mga espesipikong primer nga gidisenyo alang sa nobela nga coronavirus (SARS-Cov-2) ORF1ab ug N gene sequence. Ang solusyon sa reaksyon sa PCR adunay 3 ka set sa mga piho nga primer ug fluorescent probes alang sa piho nga pag-ila sa mga target, ug usa ka dugang nga hugpong sa mga piho nga primer ug fluorescent probes ang gigamit ingon nga internal nga sumbanan nga kontrol sa kit para sa pag-ila sa endogenous housekeeping genes.
Ang prinsipyo sa pagsulay mao nga ang espesipikong fluorescent probe natunaw ug nadaot sa kalihokan sa exonuclease sa Taq enzyme sa reaksyon sa PCR, aron ang tigbalita nga fluorescent nga grupo ug ang gipalong nga fluorescent nga grupo mabulag, aron ang sistema sa pag-monitor sa fluorescence makadawat usa ka fluorescent signal, ug dayon Pinaagi sa enrichment nga epekto sa PCR amplification, ang fluorescence signal sa probe makaabot sa usa ka set threshold value-Ct value (Cycle threshold). Sa kaso nga walay target amplicon, ang reporter nga grupo sa probe duol sa quenching group. Niini nga panahon, ang fluorescence resonance energy transfer mahitabo, ug ang fluorescence sa reporter nga grupo gipalong sa quenching group, aron ang fluorescent signal dili mamatikdan sa fluorescent PCR instrument.
Aron ma-monitor ang paggamit sa mga reagents sa panahon sa pagsulay, ang kit nasangkapan sa positibo ug negatibo nga mga kontrol: ang positibo nga kontrol naglangkob sa target nga site nga recombinant plasmid, ug ang negatibo nga kontrol mao ang Distilled nga tubig, nga gigamit sa pagmonitor sa polusyon sa kalikopan. Girekomenda nga magbutang usa ka positibo nga kontrol ug negatibo nga kontrol nga dungan kung magsulay.
【Main components 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componmga tawo | |
Name | Specification | Quantkini | Quantkini | |
Positibo nga pagkontrol | 180 μL / panaksan | 1 | 1 | Artipisyal nga gitukod nga plasmids, Distilled nga tubig |
Negatibo nga pagkontrol | 180 μL / panaksan | 1 | 1 | Distilled nga tubig |
Sagol nga SARS-Cov-2 | 358.5 μL / panaksan | 1 | / | Piho nga mga pares sa primer, espesipikong detection fluorescent probes, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Distilled water, etc |
Pagsagol sa Enzyme | 16.5 μL / panaksan | 1 | / | Taq enzymes, reverse transcriptase, UNG enzymes, ug uban pa. |
SARS-Cov-2 Mix(Lyophilised) | 25 nga mga pagsulay / vial | / | 1 | Piho nga mga pares sa primer, piho nga detection fluorescent probes, dNTPs, Taq enzymes, reverse transcriptase, Distilled water, etc. |
2x Buffer | 375 μL / panaksan | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Distilled nga tubig, ug uban pa. |
Nota:(1) Ang mga sangkap sa lain-laing mga batch kit dili mahimong sagol o ibaylo.
(2) Pag-andam sa imong kaugalingong reagent: Nucleic acid extraction kit.
【Storage conditions ug expiration date 】
For BST-SARS-25:Pagdala ug pagtipig sa -20±5 ℃ sa dugay nga panahon.
For BST-SARS-DR-25:Pagdala sa temperatura sa kwarto. Tipigi ang -20±5 ℃ sulod sa taas nga panahon.
Likayi ang balik-balik nga mga siklo sa freeze-thaw. Ang validity period temporaryo nga gitakda alang sa 12 ka bulan.
Tan-awa ang label alang sa petsa sa paghimo ug paggamit.
Human sa unang pag-abli, ang reagent mahimong tipigan sa -20±5 ° C sulod sa dili molapas sa 1 ka bulan o hangtud sa katapusan sa panahon sa reagent, bisan asa nga petsa mauna, aron malikayan ang balik-balik nga freeze-thaw cycle, ug ang gidaghanon sa reagent freeze. - ang mga siklo sa pagtunaw kinahanglan dili molapas sa 6 ka beses.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.Aplikable nga sample type: Extracted nucleic acid solution.
2.Sample nga pagtipig ug transportasyon: Tipigi ang-20±5 ℃ sulod sa 6 ka bulan. Pag-freeze ug pagtunaw sa mga sample nga dili molapas sa 6 ka beses.
【Testing method】
1.Nucleic acid extraction
Pagpili ug angay nga nucleic acid extraction kit aron makuha ang viral nucleic acid, ug sunda ang katugbang nga instruksyon sa kit. Girekomendar nga mogamit ug Nucleic acid extraction ug purification kit nga gihimo sa Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. o katumbas nga nucleic acid purification kit.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
( 1) Kuhaa ang SARS-Cov-2 Mix ug Enzyme Mix , hingpit nga matunaw sa temperatura sa lawak sagol nga maayo pinaagi sa Vortex device ug dayon centrifuge sa makadiyot.
(2) 16.5uL Enzyme Mix gidugang sa 358.5uL SARS-Cov-2 Mix ug gisagol nga maayo aron makuha ang sinagol nga solusyon sa reaksyon.
(3) Pag-andam ug limpyo nga 0.2 mL PCR octal tube ug markahan kini sa 15uL sa ibabaw nga mixed reaction solution kada atabay.
(4) Idugang ang 15 μL nga purified nucleic acid nga solusyon, ang positibo nga kontrol ug ang negatibo nga kontrol, ug pag-ayo nga tabunan ang octal tube cap.
(5) Pag-mix og maayo pinaagi sa pagpabalikbalik, ug pag-centrifuge dayon aron makonsentrar ang likido sa ilawom sa tubo.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Idugang ang 375ul 2x Buffer sa SARS-Cov-2 Mix((Lyophilised) para maandam ang reaction mix. Pagsagol pag-ayo pinaagi sa pipetting ug dayon centrifuge kadiyot. (Sa higayon nga maandam ang reaction mix, girekomenda nga tipigan sa -20 ℃ sa dugay nga pagtipig.)
(2) Pag-andam og limpyo nga 0.2 mL PCR octal tube ug markahan kini og 15μL nga reaction mix kada atabay.
(3) Idugang ang 15μL nga purified nucleic acid nga solusyon, ang positibo nga kontrol ug ang negatibo nga kontrol, ug pag-ayo nga tabunan ang octal tube cap.
(4) Pag-mix og maayo pinaagi sa pagpabalikbalik, ug pag-centrifuge dayon aron makonsentrar ang likido sa ilawom sa tubo.
3. PCR amplification (Palihug tan-awa ang manwal sa instrumento alang sa mga setting sa operasyon.)
3. 1 Ibutang ang PCR 8-tube sa sample chamber sa fluorescent PCR instrument, ug ibutang ang sample nga sulayan, ang positibo nga kontrol ug ang negatibo nga kontrol sumala sa han-ay sa pagkarga.
3.2 Kanal sa pagkakita sa fluorescence:
( 1) ORF1ab gene mipili sa detection channel sa FAM (Reporter: FAM, Quencher: Wala).
(2) Ang N gene mipili sa detection channel sa VIC (Reporter: VIC, Quencher: Wala).
(3) Ang internal nga standard gene nagpili sa detection channel sa CY5 (Reporter: CY5, Quencher: Wala).
(4) Ang Passive Reference gibutang sa ROX.
3.3 Setting sa parameter sa programa sa PCR:
Lakang | Temperatura (℃) | Panahon | Gidaghanon sa mga siklo | |
1 | Reverse transcription nga reaksyon | 50 | 15 min | 1 |
2 | Pag-aktibo sa Taq enzyme | 95 | 2.5 min | 1 |
3 | Pag-aktibo sa Taq enzyme | 93 | 10 s | 43 |
Ang pagpalapad sa Annealing ug pagkuha sa fluorescence | 55 | 30 s |
Pagkahuman sa pag-set, i-save ang file ug pagdagan ang programa sa reaksyon.
4.Results analysis
Pagkahuman sa programa, ang mga resulta awtomatiko nga maluwas, ug ang kurba sa pagpadako gisusi. Ang amplification curve gitakda sa instrument default threshold.
【Explanation of test results 】
1. Tinoa ang balido sa eksperimento: Ang positibo nga pagkontrol sa FAM, VIC channel kinahanglan nga adunay usa ka tipikal nga amplification curve, ug ang Ct nga kantidad kasagaran ubos sa 34, apan mahimong mag-usab-usab tungod sa lain-laing mga threshold setting sa lain-laing mga instrumento. Ang negatibo nga kontrol FAM, VIC channel kinahanglan nga non-amplified Ct. Gikasabutan nga ang mga kinahanglanon sa ibabaw kinahanglan matuman sa parehas nga oras, kung dili kini nga pagsulay dili balido.
2. Resulta sa paghukom
FAM/VIC channel | Resulta sa paghukom |
Ct<37 | Positibo ang sample test |
37≤Ct<40 | Ang amplification curve kay S-shaped, ug ang mga suspetsado nga mga sample kinahanglan nga susihon pag-usab; kung ang mga resulta sa re-examination mao ang makanunayon, kini gihukman nga positibo, kung dili kini negatibo |
Ct≥40 O Walay Pagpadako | Ang sample nga pagsulay negatibo (o ubos sa ubos nga limitasyon sa kit detection) |
Pahinumdom: ( 1) Kung ang FAM channel ug ang VIC channel positibo sa samang higayon, ang SARS-Cov-2 determinado nga positibo.
(2) Kung ang FAM channel o VIC channel positibo ug ang laing channel negatibo, ang pagsulay kinahanglan nga balikon. Kung kini positibo sa samang higayon, kini pagahukman nga positibo sa SARS-Cov-2, kung dili kini hukman nga negatibo sa SARS-Cov-2.